Overview

在樣品儲存和樣品制備過程中，化合物會從日常的實驗室設備中浸出。這些化合物會在HPLC、GC 和MS 的圖譜中引入不需要的鬼峰，并在包括分析質量控制在內的一系列活動中干擾樣品分析。使用HPLC、GC-MS 和LC-MS，對賽多利斯Optifit 和Safetyspace濾芯吸頭及其低吸附吸頭在移取易溶出樣品時的浸出物情況進行了測試。這些移液器吸頭被證明實際上不含浸出化合物，因此適用于高度敏感的分析方法。


引言

塑料器具被廣泛用于實驗室環境，但低品質的產品可能會對高精度的分析產生影響。污染源可能是樣品管、微孔板、移液器吸頭和塑料注射器，它們可以浸出著色劑和增塑劑，如鄰苯二甲酸鹽或DiHEMDA( 二(2-羥乙基) 甲基十二烷基銨)，導致鬼峰并干擾分析結果。為避免出現鬼峰，許多實驗室已將常用的一次性塑料器具更換為需要清潔和預潤洗的玻璃器皿。

在本研究中，使用高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質譜法(GC-MS)和液相色譜-質譜(LC-MS)法，然后在乙醇和DMSO中萃取，從而對賽多利斯Optifit和Safetyspace 濾芯吸頭及其低吸附吸頭的化學浸出物進行分析。這些溶劑的選擇是基于它們的廣泛使用以及與較溫和的溶劑(如水)相比的腐蝕性，后者可能不會產生相同水平的潛在污染物。


方法

實驗室設備相關的浸出物測試

使用100μl的1)乙醇或2)DMSO沖洗各種移液器吸頭（200μl Optifit 吸頭(產品編號790200)、Safetyspace濾芯吸頭(產品編號790201F)和低吸附吸頭( 產品編號LH-L790200和LH-LF790201))，將溶劑吸入移液器吸頭，保持5秒鐘并直接分液到樣品試管中。使用多個相同類型的移液器吸頭(5個移液器吸頭，共500μL，混合樣品) 產生足夠的測試體積，通過HPLC-UV/VIS、GC-MS或LC-HRMS 進行實驗室設備相關的浸出物分析。

HPLC-UV/VIS

將乙醇提取物進樣至配備Nucleosil C18(5μm × 250mm × 4.6mm) 色譜柱和紫外/可見光(UV/VIS) 檢測器的Agilent 1200 infinity(Agilent TechnologiesInc.，California，USA)HPLC系統。流速：1ml/min；波長：220nm；進樣體積：20μl；溫度：40°C；流動相：A) 乙腈 | B) 水

GC-MS

通過液- 液萃取制備乙醇和水提取物，并進樣至Clarus 600GC-Clarus 600TMS Turbo(PerkinElmer Inc.，Massachusetts，USA) 和C18 Elite-5MS(60m×0.25mm×0.25μm) 色譜柱。通過使用內標2-氟聯苯(10μg/ml) 進行液體注射，使用甲苯-d8(0.1μg/ml) 進行頂空注射，進行半定量。

LC-MS

將乙醇和DMSO提取物直接進樣至配備BEH C18(1.7μm，2.1×100mm) 色譜柱的Waters ACQUITY UPLC I-Class-Waters Xevo G2-XS QTof(Waters Corp，Massachusetts，USA)LC-MS 系統中( 流速：0.5ml/min；進樣體積：1μl；溫度：40°C；流動相：A) 乙腈 | B) 含有10mmolNH4CH3COO 的水，梯度：0–0.5 分鐘 5% A，0.5-9分鐘 5% A，9-39.5 分鐘 99% A，39.5-40分鐘 5%A)。通過分別對空白樣品與樣品的堿基峰離子(BPI) 色譜圖，以及空白樣品與樣品的UV/VIS 色譜圖進行目視對比，來進行篩選。


結果

對賽多利斯Optifit和Safetyspace濾芯吸頭及其低吸附吸頭進行了GC-MS和LC-MS分析。通過GC-MS對油酰胺進行定量，*大濃度為0.11ppm( 定量限，LOQ，0.01ppm；圖1)；使用LC-MS對芥酸酰胺( 圖2-3) 和bDtBPP( 雙(2,4-二叔丁基苯基)- 磷酸酯；圖4) 進行定量，*大濃度為0.14ppm(LOQ 0.001ppm) 和.026ppm(LOQ，0.001ppm)。此外，在GC-MS中，對Optifit低吸附吸頭中的十六烷酸乙酯進行定量，*大濃度為0.25ppm，檢測到一種保留時間為8.32分鐘的未知化合物，*大濃度為0.13ppm，但其結構信息不足，因此無法對其進行表征。在HPLC-UV/VIS 中，在Optifit低吸附吸頭中僅發現了少量普遍存在的抗氧化劑Irgafos 168(CAS 95906-11-9)。未檢測到超出其定量限的其他化合物(表1)。
 

圖1. 使用GC-MS對賽多利斯移液器吸頭EtOH提取物的化學浸出物進行分析。保留時間：油酰胺，19.28分鐘；芥酸酰胺，22.66分鐘( 結果低于檢測限)；未知化合物，8.32分鐘；十六烷酸乙酯，25.20 分鐘；內標Irganox 1035，12.35分鐘。


 

圖2. 使用LC-HRMS(ESI+)對賽多利斯移液器吸頭EtOH提取物的化學浸出物進行分析。保留時間：芥酸酰胺，9.84分鐘；內標Irganox 1035，9.27分鐘。


 

圖3. 使用LC-HRMS(ESI-)對賽多利斯移液器吸頭DMSO提取物的化學浸出物進行分析。保留時間：芥酸酰胺，9.84分鐘；內標Irganox 1035，9.24分鐘。


 

圖4. 使用LC-MS(ESI+)對賽多利斯移液器吸頭EtOH提取物的化學浸出物進行分析。保留時間：bDtBPP,6.97分鐘；內標Irganox 1035，9.26分鐘。


 

圖5. 使用HPLC-UV/VIS對賽多利斯移液器吸頭EtOH提取物的化學浸出物進行分析。保留時間：Irgafos 168，40.17分鐘；內標Irganox 1035( 硫代二亞乙基雙[3-(3,5- 二叔丁基-4- 羥基苯基) 丙酸酯]，CAS 41484-35-9)，30.00分鐘。

結論

從賽多利斯移液器吸頭中定量的浸出物水平低于文獻中報告的每種化合物所報告的相關濃度(表1)。觀察到的具有抗炎作用生物學相關濃度：油酰胺，100ppm(Yang 2016)；芥酸酰胺，0.338ppm(Watson 2009)；bDtBPP 對CHO 細胞生長有抑制作用，濃度為0.035-0.1ppm(Kelly 2016)；DiHEMDA，0.03ppm(McDonald 2008)。

因此，在細胞培養實驗室操作或生物分析樣品的制備中使用賽多利斯Optifit和Safetyspace 濾芯吸頭及其低吸附吸頭，預計不會對敏感的生物或生化分析產生干擾。

 

表1. 賽多利斯移液器吸頭化學浸出物

* 低于定量限(LOQ)

低于檢測限(LOD)

沒有樣品的DiHEMDA 呈陽性，因此未確定LOQ

Optifit 吸頭和 Safetyspace濾芯吸頭