Overview

在細胞培養實驗室中，預防支原體污染可能是一項艱巨的任務。但是，您可以選擇易于清潔的移液器以及無菌耗材并定期檢測，通過執行良好的細胞培養規范，從而顯著降低細胞培養實驗室的支原體污染及傳播風險。
《盡可能降低細胞培養中的支原體污染風險》應用說明闡述了支原體污染的來源及預防措施。
 

簡介

在細(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養實驗室中(zhong)，支(zhi)原(yuan)(yuan)(yuan)體(ti)污(wu)染(ran)是(shi)一(yi)種普(pu)遍存(cun)在的(de)(de)現象：在一(yi)項研究中(zhong)，研究人(ren)員測試了(le) 10, 000 個細(xi)胞(bao)系，發現其中(zhong)的(de)(de) 11 % 存(cun)在支(zhi)原(yuan)(yuan)(yuan)體(ti)污(wu)染(ran)。支(zhi)原(yuan)(yuan)(yuan)體(ti)污(wu)染(ran)如此(ci)普(pu)遍的(de)(de)部分原(yuan)(yuan)(yuan)因在于，即使在常規(gui)傳代培(pei)(pei)養中(zhong)，其也能(neng)有效地(di)傳播。而在另一(yi)項研究中(zhong)，研究人(ren)員在層(ceng)流凈化罩中(zhong)處理受支(zhi)原(yuan)(yuan)(yuan)體(ti)感染(ran)的(de)(de)細(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養物后(hou)，在燒瓶外壁(bi)、血細(xi)胞(bao)計(ji)數器(qi)上、移(yi)液器(qi)上以(yi)及廢棄(qi)培(pei)(pei)養皿外部都檢測到了(le)活支(zhi)原(yuan)(yuan)(yuan)體(ti)。事(shi)實上，甚(shen)至(zhi)在四到六(liu)天之后(hou)，從(cong)層(ceng)流罩表面也回收到了(le)活支(zhi)原(yuan)(yuan)(yuan)體(ti)。并(bing)且在處理過受支(zhi)原(yuan)(yuan)(yuan)體(ti)污(wu)染(ran)的(de)(de)細(xi)胞(bao)的(de)(de)同一(yi)個層(ceng)流凈化罩內(nei)傳代培(pei)(pei)養純凈的(de)(de)培(pei)(pei)養物 6 周后(hou)，也檢測到支(zhi)原(yuan)(yuan)(yuan)體(ti)呈陽性(xing)。

什么是支原體

支原體是一類沒有細胞壁的細菌。由于缺少細胞壁，它們可以呈現不同的形狀，從圓形到細長形都有，并對抗生素具有耐藥性。支原體體積小（0.2 – 0.8 μm），可穿過除菌級過濾器，這使其成為一種非常難以去除的污染物。此外，體積小也導致其難以在細胞培養中被發現。

在細胞培養中，支(zhi)(zhi)原體(ti)可抑制蛋白質(zhi)生物合成(cheng)以及細胞生長，并會改變(bian)RNA和DNA合成(cheng)，從而影(ying)響研究結果(guo)。在細胞治療(liao)和先進治療(liao)藥物產品（ATMP）中，支(zhi)(zhi)原體(ti)污染會引起免疫反(fan)應、染色體(ti)畸變(bian)或(huo)增殖特性(xing)改變(bian)，從而影(ying)響患(huan)者的治療(liao)安全性(xing)。

支原體污染(ran)的(de)潛在途徑包括(kuo)：

- 受污染的培養基、試劑或儀器

- 實驗室人員（約 80.6 %的技術人員為支原體攜帶者）

- 其他實驗室的被感染培養物


支原體留存在移液器表面

移液器經常暴露在污染物中，并可能攜帶污染物。通過對移液器高壓滅菌和乙醇擦拭的去污效率比較顯示，用 70 %乙醇去污可使回收到的細菌數量減少一個對數級以上，而對移液器進行高壓滅菌可以完全去除其中的支原體污染。

為降低支原體污染風險，請使用可高壓滅菌的移液器進行細胞培養工作。賽多利斯整支可高壓滅菌的Tacta移液器是細胞培養工作的好選擇。
 

避免支原體污染的良好實踐

您可以通過以下操作規程進行無污染的細胞培養：

1. 實施良好細胞培養規范

《良好的細(xi)胞培養規范(fan)》中的關鍵(jian)指導原則包括(kuo)：一(yi)次只(zhi)培(pei)養(yang)一(yi)個(ge)細胞(bao)系；清晰標記用于細胞(bao)培(pei)養(yang)工作(zuo)的(de)移(yi)(yi)液器、移(yi)(yi)液助吸器及移(yi)(yi)液器吸頭；僅在細胞(bao)培(pei)養(yang)實驗室使用這些移(yi)(yi)液器和吸頭；禁止將其從(cong)細胞(bao)培(pei)養(yang)實驗室轉移(yi)(yi)到另一(yi)個(ge)實驗室，然后再轉移(yi)(yi)回來。只(zhi)能使用專為細胞(bao)培(pei)養(yang)工作(zuo)指定(ding)的(de)試(shi)劑(ji)，不(bu)得使用專用于其他應用的(de)儲(chu)備溶液。

2. 選擇易于清潔且可高壓滅菌的移液器用于細胞培養工作

液體溢漏和飛濺是造成污染的主要來源，而移液器和液體處理控制器的維護在降低這類污染風險方面發揮著重要的作用。實驗室應針對定期的去除污染和維護作業制定相關指南和方案。去除細(xi)菌污染的有效(xiao)清潔(jie)方法包括：

- 高壓滅菌

- 堿性清潔劑

- 乙醇過氧化氫蒸汽VHP


賽多利斯Tacta移液器只需拆卸三個部件即可清潔，而且拆卸操作無需使用工具。Tacta 還可以整支進行蒸汽消毒或熱壓滅菌，它還具有強大的紫外線耐受力和耐化學腐蝕性。

3. 選擇帶有防護包裝的無菌濾芯吸頭

濾芯(xin)吸(xi)頭是細胞培養(yang)工作中安(an)全的選擇，因其(qi)為樣本和移液器提供了優質的防(fang)護，并(bing)且可以防(fang)止(zhi)支原體通過氣溶膠傳播(bo)。

4. 定期檢測

定期檢測所有細胞系的支原體污染情況，尤其是新細胞系。將新細胞系隔離在單獨的培養箱中，直到可以明確證明其未受支原體污染。

賽多利斯Microsart支原體檢測試劑盒，采用RT-PCR的方法， 3小時內即可獲得可靠結果。高特異性Taqman探針，無需擔心假陽性結果，并且完全符合EP 2.6.7法規要求。

5. 使用 0.1 μm的濾器過濾

高壓滅菌是殺死支原體的有效方法，但不適用于某些培養基和試劑，因為高溫會破壞許多營養素和生長因子。對于細胞大小為 0.2 - 0.8 μm且可通過孔徑大于 0.1 μm孔的支原體而言，能有效防止細菌和真菌通過的孔徑為 0.22 μm的標準無菌過濾通常是不夠的。因此，為防止支原體污染，在過濾細胞培養試劑和培養基時，應使用 0.1 μm孔徑的無菌過濾器，而不是標準的 0.22 μm過濾器。
 

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