Overview

藥品通常是根據嚴格的GMP指南生產的，作為批量放行前的保險措施，所有藥品都要經過嚴格的無菌檢測，以確定是否存活微生物。Sterisart是一種基于膜過濾法的無菌檢測封閉系統。該封閉系統不需要對膜過濾器進行物理操作，從而可降低二次污染和假陽性的風險。

材料和方法

耗材

胰蛋白大豆肉湯（TSB）（Gila/BD）、硫乙醇酸鹽液體培養基（FTM）（Gila/BD）、TSB（Merck）、FTM（Merck）、胰蛋白大豆瓊脂（TSA）（Merck）、玻璃反應管 - 30 mL（Borosil）、針頭–0.90×70 mm、2OG×2（Sterican–B.Braun）、注射器–F Luer（Omnifix–B.Braun）。

設備

Sterisart，培養箱，Combisart 三聯過濾支架，直排泵。

Sterisart NF無菌試驗系統

16467--------GSD, 16475--------GSD, 16466--------GSD

膜過濾

在隔膜取樣試驗中，對來自三種隔膜類型的分別10個Sterisart 料筒（總共 30 個）進行了分析。

10個料筒中有一個（來自每種Sterisart 容器類型）作為陰性對照。

在無菌條件下，在生物安全柜中往Sterisart培養料筒中灌裝生長培養基。將兩個Sterisart料筒放置在泵支架上，并使Sterisart管路系統穿過泵頭。使用封閉的翼形螺母塞密封每個Sterisart料筒的出口。兩個無菌通風過濾器不加蓋。打開Y型分配器出口處的黃色管夾，并關閉相鄰的白色管夾。將雙針金屬釘插入裝有FTM的瓶子中，并開啟Sterisart泵。將預定體積（75 ml）的培養基轉移到前一個料筒中后，關閉泵。打開Y型分配器出口處的白色管夾，并關閉相鄰的黃色管夾。將雙針金屬釘插入裝有TSB的瓶子中，并開啟Sterisart泵。將相似體積（75 ml）的培養基轉移到第二個料筒中。使用培養料筒入口上方的兩個夾具密封管道，從而切斷管路。

將含有TSB的Sterisart料筒在 22.5 °C下培養 24 天。其中TSB是用于檢測低發病率真菌和好氧細菌的推薦生培養基。將含有FTM的Sterisart料筒在 32.5 °C下培養 24 天。其中FTM是用于培養需氧、微需氧和厭氧微生物的推薦生長培養基。

隔膜取樣

無菌條件下，在生物安全柜中從Sterisart料筒中提取樣品。從Sterisart培養料筒的頂部、中部和底部提取三個樣品，每個樣品 100 μl，每天提取兩次，共持續 17 天（3×2×17=102 個樣品）。將提取的樣品轉移到含有無菌液體培養基、FTM和TSB的玻璃反應管中。含有TSB的小瓶在 22.5 °C下培養 14 天，含有FTM的小瓶在 32.5 °C下培養 14 天。通過對每個Sterisart裝置和相應的提取樣品進行拍照，以便記錄結果。

微生物計數

使用放置在無菌Combisart過濾裝置中的黑色網格膜過濾器，并連接至直排泵，以進行*后的檢查。在Sterisart料筒中培養 24 天后，將 60 - 70 ml TSB填充到漏斗中，并通過黑色薄膜過濾器過濾。使用無菌鑷子將過濾器轉移到TSA板上，并將該板在 36 °C下培養 3 - 5 天。然后檢查這些板是否有微生物污染。

結果與討論

在 102 次隔膜穿孔并反復提取樣本后，確定所有Sterisart 料筒（3 × 9 個含有FTM，3 × 9 個含有TSB；第 10 個料筒含有FTM和TSB作為各自的對照）均為無菌，且在 24 天后未檢測到微生物污染。（圖1）

同樣，所提取的樣品也是無菌的，沒有微生物生長，這表明Sterisart隔膜可以實現高效和高度可靠的無菌取樣。（圖2）

圖1：重復提取樣品后無微生物污染。Sterisart 16466 GSD 版本填充了TSB（A和B）或FTM（C和D），并分別在 22.5 °C和 32.5 °C下培養 24 天期間的代表性圖像。陰性對照顯示在A和C中。

為了進行樣品提取，B和D中的料筒被穿孔 102 次。

圖2：從Sterisart16466 GSD 提取的樣品在玻璃瓶中培養后沒有微生物污染。將樣品接種到含有TSB（上層板）和FTM（下層板）的玻璃瓶中，分別在22.5° C和32.5° C下生長 14 天。

當隔膜被多次刺穿或使用了不合適的針型時，可能會發生“結晶”的情況。在某些Sterisart料筒中，僅在 36 次穿孔后就觀察到微小顆粒。24 天后在黑色薄膜過濾器上收集這些顆粒，并監測其在TSA板上形成菌落的能力。這些顆粒即使在培養五天后也沒有表現出任何生長跡象，這表明這些顆粒在本質上不具生物活性。根據其形態，我們得出結論，這些惰性顆粒是在注射器針頭反復穿刺過程中從隔膜上剪下的橡膠碎片。這些碎片不會影響無菌試驗的效果，并且幾乎不會落入在生長培養基中。

結果表明，Sterisart 料筒即使在連續提取 102 個樣品后，仍然是一個封閉且無菌的裝置。

結論

總而言之，該研究證明了Sterisart隔膜的強大性能，即使在提取了 100 多個樣品后仍能保持完整的無菌環境。

在無菌檢測產品中，由于防腐劑和抗菌劑的存在，在很大程度上阻礙了依賴直接接種的快速檢測方法的采用。此類產品的膜過濾及隨后的膜沖洗可減少無菌檢測期間出現假陰性的風險。通過膜過濾實現大體積分析，并實現樣品提取，從而為用戶提供了將封閉系統無菌檢測與快速無菌檢測方法相結合的能力。